abi7500熒光定量pcr使用方法
Q:7500快速定量PCR儀可以使用0.2ml PCR反應管或者96孔板嗎?
A:不可以，7500 快速定量PCR儀只支持0.1ml PCR反應管或者96孔板
Q:如何監(jiān)控反應體系是否有蒸發(fā)?
A:查看Rox信號是否在整個PCR過程中保持一致。在多組分圖譜界面，選擇單孔，如果Rox信號逐漸增高，代表樣品孔中有蒸發(fā)。如下圖所示:
Q:內參基因與目標基因是否需要在相同的反應板上運行相對定量?
A:是，內參基因必須和目標基因在相同的反應板上。軟件可以根據在相同反應板上的內參基因和目標基因自動進行相對定量計算，并計算估值區(qū)間。
Q:定量PCR系統(tǒng)支持的熒光染料有哪些?
A:下面是實時定量PCR儀器能夠檢測染料的表:
DYE | 7300 | 7500 | 7900 |
Cy3™ |
| X |
|
Cy5™ |
| X |
|
FAM™ | X | X | X |
JOE™ | X | X | X |
NED™ | X | X | X |
ROX™ | X | X | X |
SYBR® Green I | X | X | X |
TAMRA™ | X | X | X |
Texas Red® |
| X |
|
TET™ |
|
| X |
VIC® | X | X | X |
Q:用戶是否可以添加自定義染料?
A:可以，可以添加自定義染料，但染料的激發(fā)和發(fā)射波長必須與儀器的濾光片設置兼容。
Q:常用熒光染料的發(fā)射波長為多少?
A:
染料名稱 | 發(fā)射波長(nm) |
FAM™ | ~520 |
SYBR® Green I | ~520 |
TET™ | ~540 |
JOE™ | ~550 |
VIC® | ~550 |
NED™ | ~580 |
CY3™ | ~580 |
TAMRA™ | ~580 |
ROX™ | ~610 |
Texas Red® | ~610 |
CY5™ | ~670 |
Q:ABI各種型號的定量PCR儀有什么特點?
A:
◆ 7300、7500、7500 快速系統(tǒng)是用鹵鎢燈作為激發(fā)光源，并利用濾光片檢測激發(fā)熒光
◆ 7300是一個激發(fā)光和四色濾光片
◆ 7500和7500快速有五個激發(fā)光和五個濾光片，所以可以檢測遠紅外。
◆ 7900HT系統(tǒng)是用氬離子激光作為激發(fā)光源，可以掃描500nm -650nm所有波長的熒光
◆ 7900HT系統(tǒng)可以提供更高通量，如 384孔板和低密度芯片升級，以及自動手臂來裝載反應板設備
Q:BHQ作為探針的淬滅基團，在ABI定量PCR系統(tǒng)如何設定?
A:淬滅基團設為none。
Q:7300/7500/7900HT定量PCR系統(tǒng)軟件生成的文件有哪些?
A:針對7300 v1.4及以下版本軟件，7500 v1.4 及以下版本軟件，7900HT軟件生成的文件，包含擴增曲線的為數據文件，以 sds為文件后綴。相對定量分析產生以sdm為后綴文件，設置模板以 sdt為后綴。
針對7500 v2.0版本軟件，包含擴增曲線的為數據文件，以 eds為文件后綴。相對定量分析產生以edm為后綴文件，設置模板以 edt為后綴。
